高效液相色谱柱的再生方法和操作步骤

由于色谱柱在分离样品的过程中，色谱柱中固定相对检测样品中不同成分的吸附程度不同，使各成分分离，而色谱柱在吸附样品时，样品中所含有的盐、脂质、疏水蛋白质和其它一些生物物质都有可能与色谱柱发生相互作用，一些保留值较小的物质如盐类比较容易被冲出色谱柱，而一些保留性交强的流动相溶液成分不足以把这些物质洗脱下来，多次上样后，这些吸附在柱子表面的物质通常就会积累在柱头。

当这些被吸附的样品成分累积到一定程度足以使之形成新的固定相而分离机理，以致样品保留时间会波动，会出现拖尾现象。

高效液相色谱仪色谱柱的污染的直接表现是色谱峰形变差、展宽、不对称、拖尾还有柱效下降等，进而影响色谱数据的准确性。导致色谱柱不能再继续使用的主要原因是长期使用过程中，样品中强保留物质逐渐在色谱柱中积累造成的，情况严重的直接造成色谱柱报废。为延长色谱柱的使用寿命，常用到的方法是色谱柱再生。

高效液相色谱柱的再生就是对在正常使用过程中，被严重污染而常规清洗方法不能有效清除出污染杂质的色谱柱进行再处理，从而达到去除污染物，明显提高色谱柱各项性能指标，使之恢复可继续使用状态的一系列清洗过程。

色谱柱再生方法主要是根据固定相来选择，根据不同固定相选择的方法如下：

反相柱：分别用甲醇：水=90：10、纯甲醇、二氯甲烷等溶剂着流动相，依次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积。然后再以相反的次序冲洗。

正相柱：分别用正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇等溶剂做流动相，顺次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积(异丙醇粘度大，可降低流速，避免压力过高)。注意使用溶剂的次序不要颠倒，用甲醇冲洗完后，再以相反的次序冲洗至正己烷。所有的流动相必须严格脱水。

离子交换柱：长时间在缓冲溶液中使用和进样，将导致色谱柱离子交换能力下降，。用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生，反之，用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。

色谱柱再生的操作步骤如下：

1、首先倒转柱子;

2、以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照水—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水进行;

3、柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。

并不是所有报废的色谱柱都可以成功再生，还有色谱柱的再生，分析认为确实能在一定程度上显著改善色谱柱的质量，使其恢复到可用状态但即使经过很成功的再生，色谱柱也不可能恢复到新柱的水平，液相色谱仪的色谱柱到了一定的使用期限，色谱柱就不可再生了。