1、高安(黄浩然饰):法证部高级化验师,35岁。拥有冷静缜密的头脑、干练专注的工作能力,以科学为本,不作妄断,深信证物当中必定藏有真相。童年的一段沉痛过去成为高安心中无法弥补的遗憾,让他练就出无比意志,面对再难的关口也不轻易流泪。本与女友侯敏莉感情稳定,但在道义与爱情之间,敏莉选择了前者,并忍痛向高安提出分手。
2、闻家希(李施嬅饰)法医科高级医生,33岁。性格乐观,冷静理性,睿智果断。家希把姐姐作为偶像,可惜姐姐却意外逝世,家希化悲痛为力量,代替姐姐实践她生前的理想,励志成为法医。在命运的安排下,家希重遇姐姐的男友施见贤。因为她的声音和姐姐非常相似,见贤透过家希重拾往昔和她姐姐在一起的感觉,错将家希视作爱的替身。
3、郭辉煌(谭俊彦饰)重案组高级督察,37岁。重情谊、具魄力,乐于助人,不拘小节,奋勇坚持,一旦认清目标,便会朝着目标进发。实事实干,处事英明,凭着独到的感觉和谨慎的办案手法,成功破解不少疑案谜团,将真凶绳之以法。辉煌与慧明因工作而变得熟络,他在慧明大受打击之时从旁给予安慰和支持,两人情苗安长。
4、水慧明(陈炜饰)法证部科学鉴证主任,38岁。聪慧过人,拥有出色的处事能力和良好的工作态度。面对工作时,既有女性的心思细密,也有男性的理性实际。视上司高安为学习对象,努力不懈,遇强愈强。慧明遭男友贺立维背叛,感情受创,庆幸辉煌在旁予以支持和鼓励,让她得以鼓起勇气,抽身而退。